زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B (BD/B

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط BoNT/B، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B، به‌منظور کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفت. روش بررسی: ابتدا توالی ژن ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ  Bاز سایت NCBI با کد دسترسی EF028399.1 گرفته شد. بعد از بهینه‌سازی کدون، ژن مورد نظر به‌صورت صناعی در داخل وکتور pUC18 تهیه گردید. سپس این ژن در وکتور بیانی pET32a(+) که دارای مارکر انتخابی آمپی‌سیلین می‌باشد، زیرهمسانه‌سازی شد. جهت تأیید صحت زیرهمسانه‌سازی؛ از PCR، برش آنزیمی و تعیین توالی و برای بررسی بیان از سوش E. coli BL21(DE3) استفاده گردید. صحت بیان پروتئین با الکتروفورز (تحت شرایط مختلف و روش وسترن بلات) مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: واکنش‌های PCR، برش آنزیمی را براساس سایت‌های برشی در وکتور و در نهایت، تعیین توالی تأیید کرد که ژن مورد نظر به‌طور مناسب در وکتور pET32a(+)، همسانه‌سازی شد. بررسی بیان با استفاده از SDS- PAGE و متعاقب آن انجام وسترن بلاتینگ نشان داد پروتئین مورد نظر در سویه بیانی مذکور بیان نمی‌شود. نتیجه‌گیری: اگرچه ژن مورد نظر در داخل وکتورpET32a(+)، به‌طور مناسب زیرهمسانه‌سازی گردید، با این حال هیچ بیان قابل‌مشاهده‌ای از ژن مورد نظر دیده نشد.